Новий мультиплексний комплект ПЛР у режимі реального часу для коронавірусу (SARS-CoV-2)
Цей високочутливий, готовий до використання ПЛР-комплект доступний у ліофілізованому форматі (процес сублімаційної сушки) для тривалого зберігання. Набір можна транспортувати та зберігати при кімнатній температурі і стабільний протягом року. Кожна пробірка преміксу містить усі реагенти, необхідні для ампліфікації ПЛР, включаючи зворотну транскриптазу, Taq-полімеразу, праймери, зонди та субстрати dNTP. Потрібно лише додати 13 мкл дистильованої води та 5 мкл екстрагованої РНК-матриці, тоді її можна запускати та посилювати на ПЛР-інструментах.
Машина qPCR повинна відповідати наступним вимогам:
1. Встановіть 8-смугову ПЛР-пробірку об’ємом 0,2 мл
2. Мати більше чотирьох каналів виявлення:
Канал |
Збудження (нм) |
Викиди (нм) |
Попередньо калібровані барвники |
1. |
470 |
525 |
FAM, SYBR Зелений I |
2 |
523 |
564 |
VIC, HEX, TET, JOE |
3. |
571 |
621 |
ROX, ТЕКСАН-ЧЕРВОНИЙ |
4 |
630 |
670 |
CY5 |
ПЛР-платформи:
7500 Система ПЛР у реальному часі, Biorad CF96, Система виявлення ПЛР в реальному часі iCycler iQ ™, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
Складність транспортування холодового ланцюга реагенту для виявлення нуклеїнової кислоти коронавірусу
Коли звичайні реагенти для виявлення нуклеїнових кислот транспортуються на великі відстані, необхідне зберігання та транспортування (-20 ± 5) ℃ холодного ланцюга для забезпечення активності біоактивних речовин ферменту в реагентах. Щоб переконатися, що температура досягає норми, потрібно кілька кілограмів сухого льоду на кожну коробку реагенту для тестування нуклеїнових кислот навіть менше 50 г, але це може тривати лише два-три дні. На перспективу галузевої практики фактична вага реагентів, випущених виробниками, становить менше 10% (або набагато менше цієї величини) тари. Більшість ваги припадає на сухий лід, пакети з льодом та пінопласти, тому транспортні витрати надзвичайно високі.
У березні 2020 року COVID-19 почав широко розповсюджуватися за кордоном, і попит на реагент для виявлення нуклеїнової кислоти з коронавірусом різко зріс. Незважаючи на високу вартість експорту реагентів у холодному ланцюзі, більшість виробників все ще можуть прийняти його через велику кількість та високий прибуток.
Однак із вдосконаленням національної експортної політики щодо антипандемічної продукції, а також посиленням національного контролю за потоком людей та логістикою спостерігається подовження та невизначеність часу транспортування реагентів, що призвело до значних проблем із продуктами, транспортом. Збільшений час транспортування (час транспортування, який становить близько півмісяця, дуже часто) призводить до частих відмов товару, коли товар надходить до клієнта. Це турбує більшість підприємств-експортерів реагентів з нуклеїнових кислот.
Ліофілізована технологія реагенту ПЛР допомогла транспортуванню реагенту для виявлення нуклеїнових кислот коронавірусу по всьому світу
Ліофілізовані ПЛР-реагенти можна транспортувати та зберігати при кімнатній температурі, що може не тільки зменшити транспортні витрати, але й уникнути проблем із якістю, спричинених процесом транспортування. Тому ліофілізація реагенту є найкращим способом вирішення проблеми експортних перевезень.
Ліофілізація передбачає заморожування розчину до твердого стану, а потім сублімацію та відокремлення водяної пари в умовах вакууму. Висушена розчинена речовина залишається в контейнері з однаковим складом і активністю. Порівняно зі звичайними рідкими реагентами, повнокомпонентний ліофілізований реагент для виявлення нуклеїнової кислоти Nown Coronavirus, вироблений Liming Bio, має такі характеристики:
Надзвичайно сильна термостійкість: він може витримувати обробку при температурі 56 ℃ протягом 60 днів, при цьому морфологія та характеристики реагенту залишаються незмінними.
Зберігання та транспортування за нормальної температури: немає необхідності в холодному ланцюзі, не потрібно зберігати при низькій температурі перед розпечатуванням, повністю звільніть місце для зберігання в холоді.
Готовий до використання: ліофілізація всіх компонентів, відсутність необхідності в конфігурації системи, уникаючи втрати компонентів з високою в'язкістю, таких як фермент.
Мультиплексовані мішені в одній трубці: ціль виявлення охоплює новий ген коронавірусу ORF1ab, ген N, ген S, щоб уникнути геноваріації вірусу. Для зменшення хибнонегативного гена людини РНКаза Р використовується як внутрішній контроль, щоб задовольнити клінічну потребу в контролі якості зразків.